單克隆抗體制備是針專一的抗原決定簇產(chǎn)生的抗體，單克隆技術(shù)又名雜交瘤技術(shù)起源于1975年，由G.K?hler和Milstein創(chuàng)立。主要原理是利用產(chǎn)生抗體的B細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞雜交融合成雜交瘤細(xì)胞，生產(chǎn)抗體。
雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗是針對(duì)體的主要步驟包括：
(1)抗原制備;
(2)**動(dòng)物;
(3)**脾細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞的制備;
(4)細(xì)胞融合;
(5)雜交瘤細(xì)胞的選擇培養(yǎng);
(6)雜交瘤細(xì)胞的篩選;
(7)雜交瘤細(xì)胞的克隆化;
(8)單克隆抗體的檢定;
(9)分泌單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞系的建立;
(10)單克隆抗體的大量制備。
下面簡(jiǎn)要介紹單克隆抗體制備過(guò)程：
1、**動(dòng)物 **動(dòng)物是用目的抗原**小鼠，使小鼠產(chǎn)生致敏B**細(xì)胞的 過(guò)程。 一般選用6-8周齡雌性Balb/c小鼠，按照預(yù)先制定的**方案進(jìn)行**注射。 抗原通過(guò)血液循環(huán)或**循環(huán)進(jìn)入外周**器官，刺激相應(yīng)B**細(xì)胞克隆，使其活化、增殖，并分化成為致敏B**細(xì)胞。
2、細(xì)胞融合 采用眼球摘除放血法處死小鼠，無(wú)菌操作取出脾臟，在平皿內(nèi)擠壓研磨，制備脾細(xì)胞懸液。 將準(zhǔn)備好的同系骨髓瘤細(xì)胞與小鼠脾細(xì)胞按一定比例混合，并加入促融合劑聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，各種**細(xì)胞可與骨髓瘤細(xì)胞發(fā)生融合，形成雜交瘤細(xì)胞。
3、選擇性培養(yǎng) 選擇性培養(yǎng)的目的是篩選融合的雜交瘤細(xì)胞，單克隆抗體制備一般采用HAT選擇性培養(yǎng)基。在HAT培養(yǎng)基中，未融合的骨髓瘤細(xì)胞因缺乏次黃嘌呤-鳥(niǎo)嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶，不能利用補(bǔ)救途徑合成DNA而死亡。 未融合的**細(xì)胞雖具有次黃嘌呤-鳥(niǎo)嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶，但其本身不能在體外長(zhǎng)期存活也逐漸死亡。 只有融合的雜交瘤細(xì)胞由于從脾細(xì)胞獲得了次黃嘌呤鳥(niǎo)嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶，并具有骨髓瘤細(xì)胞能無(wú)限增殖的特性，因此能在HAT培養(yǎng)基中存活和增殖。
4、雜交瘤陽(yáng)性克隆的篩選與克隆化 在HAT培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的雜交瘤細(xì)胞，單克隆抗體制備只有少數(shù)是分泌預(yù)定特異性單克隆抗體的細(xì)胞，因此，必須進(jìn)行篩選和克隆化。通常采用有限稀釋法進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)。采用靈敏、快速、特異的**學(xué)方法，篩選出能產(chǎn)生所需單克隆抗體的陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞，并進(jìn)行克隆擴(kuò)增。經(jīng)過(guò)**鑒定其所分泌單克隆抗體的**球蛋白類型、亞類、特異性、親和力、識(shí)別抗原的表位及其分子量后，及時(shí)進(jìn)行凍存。
5、單克隆抗體的大量制備 單克隆抗體的大量制備重要采用動(dòng)物體內(nèi)誘生法和體外培養(yǎng)法。
豬末端補(bǔ)體復(fù)合體C5b-9(C5b-9)ELISA試劑盒 porcine Terminal Complement Complex C5b-9 (C5b-9) ELISA Kit 0.781-50ng/mL 0.32ng/mL 試劑應(yīng)從靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、簡(jiǎn)便性、**性及經(jīng)濟(jì)性**評(píng)價(jià)。
豬**球蛋白G(IgG)ELISA試劑盒 porcine Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit 1.23-100ug/mL 0.53ug/mL 試劑應(yīng)從靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、簡(jiǎn)便性、**性及經(jīng)濟(jì)性**評(píng)價(jià)。
豬**球蛋白E(IgE)ELISA試劑盒 porcine Immunoglobulin E (IgE) ELISA Kit 0.156-10ng/mL 0.066ng/mL 試劑應(yīng)從靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、簡(jiǎn)便性、**性及經(jīng)濟(jì)性**評(píng)價(jià)。
豬**球蛋白A(IgA)ELISA試劑盒 porcine Immunoglobulin A (IgA) ELISA Kit 31.25-2000pg/mL 13.2pg/mL 試劑應(yīng)從靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、簡(jiǎn)便性、**性及經(jīng)濟(jì)性**評(píng)價(jià)。
豬類胰蛋白酶(TPS)ELISA試劑盒 porcine Tryptase (TPS) ELISA Kit 0.313-20ng/mL 0.123ng/mL 試劑應(yīng)從靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、簡(jiǎn)便性、**性及經(jīng)濟(jì)性**評(píng)價(jià)。
豬顆粒酶M(GZMM)ELISA試劑盒 porcine Granzyme M (GZMM) ELISA Kit 15.625-1000 pg/mL 8.9 pg/mL 試劑應(yīng)從靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、單克隆抗體制備簡(jiǎn)便性、**性及經(jīng)濟(jì)性**評(píng)價(jià)。
豬抗神經(jīng)節(jié)苷脂M1抗體(Anti-GM1)ELISA試劑盒 porcine Anti-Ganglioside M1 Antibody (Anti-GM1) ELISA Kit 3.125-200 U/L 1.3 U/L 試劑應(yīng)從靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、簡(jiǎn)便性、**性及經(jīng)濟(jì)性**評(píng)價(jià)。
豬抗繆勒管**(AMH)ELISA試劑盒 porcine Anti-Mullerian Hormone (AMH) ELISA Kit 0.156-10 ng/mL 0.041 ng/mL 試劑應(yīng)從靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、簡(jiǎn)便性、**性及經(jīng)濟(jì)性**評(píng)價(jià)。
豬巨噬細(xì)胞炎性蛋白3β(MIP3β)ELISA試劑盒 porcine Macrophage Inflammatory Protein 3 Beta (MIP3b) ELISA Kit 15.625-1000 pg/mL 7.4 pg/mL 試劑應(yīng)從靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、簡(jiǎn)便性、**性及經(jīng)濟(jì)性**評(píng)價(jià)。
豬巨噬細(xì)胞炎性蛋白3α(MIP3α)ELISA試劑盒 porcine Macrophage Inflammatory Protein 3 Alpha (MIP3a) ELISA Kit 15.625-1000 pg/mL 4.9 pg/mL 試劑應(yīng)從靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、簡(jiǎn)便性、**性及經(jīng)濟(jì)性**評(píng)價(jià)。
豬巨噬細(xì)胞炎性蛋白1β(MIP1β)ELISA試劑盒 porcine Macrophage Inflammatory Protein 1 Beta (MIP1b) ELISA Kit 31.25-2000 pg/mL 12.7 pg/mL 試劑應(yīng)從靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、簡(jiǎn)便性、**性及經(jīng)濟(jì)性**評(píng)價(jià)。
豬睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(CNTF)ELISA試劑盒 porcine Ciliary Neurotrophic Factor (CNTF) ELISA Kit 62.5-4000pg/mL 22.4pg/mL 試劑應(yīng)從靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、簡(jiǎn)便性、**性及經(jīng)濟(jì)性**評(píng)價(jià)。
豬結(jié)合珠蛋白(Hpt)ELISA試劑盒 porcine Haptoglobin (Hpt) ELISA Kit 78.125-5000ng/mL 25.5ng/mL 試劑應(yīng)從靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、簡(jiǎn)便性、**性及經(jīng)濟(jì)性**評(píng)價(jià)。
豬結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)ELISA試劑盒 porcine Connective Tissue Growth Factor (CTGF) ELISA Kit 0.625-40ng/mL 0.242ng/mL 試劑應(yīng)從靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、簡(jiǎn)便性、**性及經(jīng)濟(jì)性**評(píng)價(jià)。
